描寫的是一對孿生姊妹（胡蝶兼飾）的不同遭遇。妹妹二寶自幼跟隨私販洋槍的父親逃往城市，長大以後被父親送給了軍閥錢督辦做姨太太；姐姐大寶則和母親（宣景琳飾）一起住在鄉下，後來嫁給一個窮苦的木匠桃哥（鄭小秋飾），父母姊妹不通音訊，彼此不知下落。十多年後，大寶夫婦和母親從鄉下流落到城市。桃哥去做工，大寶拋下未滿月的孩子，到錢督辦的公館去當奶媽，她帶的正好是二寶的孩子。二寶作為主婦，對大寶非常冷淡，甚至因為大寶外貌酷似自己而感到反感；大寶為了保住飯碗，只好盡心服侍小主人。一天，桃哥幹活時摔傷，無錢醫治，大寶便懇求二寶預支一點工錢，但二寶非但不肯，反而打了大寶一記耳光。大寶為了救治丈夫，便竊取了小主人的金鎖片，不巧又被錢督辦的妹妹撞見，大寶失手碰倒花瓶，致使錢妹遭誤傷而亡，大寶即以殺人罪入獄。大寶入獄後，母親前來探監，才發現主辦大寶一案的軍法處長正是遺棄自己多年的丈夫。丈夫在妻子的憤怒斥責和要求下，安排妻子和大寶、二寶會面。真相大白後，二寶終於為母親和姐姐的苦難遭遇所感動，不顧父親勸阻，帶領她們驅車前往錢督辦處求情。1934年，《姊妹花》被評選為最佳有聲片；1935年，《姊妹花》曾和《漁光曲》等影片一起被推薦參加莫斯科電影節展映。